Jabois, Raúl Gerencia de Calidad, Génesis-MANLAB Téc. Campitelli, Jorge Sección Química Clínica, Génesis- MANLAB

E – mai:  jorge.campitelli@genesis-manlab.com.ar

Introducción

La hemoglobina es una de las proteínas presente en los eritrocitos y su función principal consiste en transportar el oxígeno y el dióxido de carbono en la sangre. Cada molécula de hemoglobina es capaz de fijar cuatro moléculas de oxígeno. La heterogeneidad molecular de la hemoglobina humana (Hb) es un hecho plenamente reconocido. Kunkel y Wallenuis en 1955, fueron los primeros en observar las fracciones menores de la Hb en electroforesis en bloque de almidón; describieron un componente pequeño y lento (HbA2) y una fracción rápida (HbA3), perfectamente diferenciables del componente mayor (HbA0) o Hb A del adulto. Allen y col., fueron los primeros en separar las Hbs A1a, A1b y A1c (Hb A1) de las Hbs A0 y A2, por cromatografía en columna con una resina de intercambio catiónico. Esas fracciones menores resultaron ser idénticas a la HbA3, observable por electroforesis convencional como una fracción difusa y anódica (por su mayor carga negativa) respecto de la A0. Por muchos años estas fracciones rápidas de la Hb permanecieron solamente como una curiosidad, hasta que en 1967, Rahbar demostró que su concentración se halla incrementada en los pacientes diabéticos descompensados, considerándola un “componente hemoglobínico del diabético”. Trabajos posteriores confirmaron la perfecta identidad entre la “Hb diabética” y la HbA1C.

La diabetes se define como un estado hiperglucémico que con el correr de los años se manifiesta por daño a múltiples órganos, siendo la primera causa de ceguera, de falla renal y de amputaciones en los adultos, y una de las principales causas de enfermedad cardiaca y de trombosis. Desde que se descubrió la hemoglobina A1C (HbA1c), ésta ha sido el indicador más fiel para monitorear los pacientes diabéticos y gracias a la estandarización alcanzada en la prueba en los últimos años, la American Diabetes Association (ADA) la incorporó recientemente como el primer criterio de diagnóstico de diabetes en individuos asintomáticos o con sospecha clínica de esta enfermedad. La ADA ha definido tres puntos de corte para la HbA1c: menor o igual a 5,6%, nivel no diabético; entre 5,7% y 6,4%, nivel prediabético; y, mayor o igual a 6,5%, compatible con el diagnóstico de diabetes. Igualmente, la ADA mantiene como meta en el tratamiento del paciente diabético un nivel de HbA1c menor o igual a 7%.

La HbA1c se forma continuamente por la adición de glucosa a la porción N-terminal de la cadena beta de hemoglobina. Este proceso no enzimático refleja el promedio de exposición de la hemoglobina a los niveles de glucosa sanguíneos de los últimos 2 a 3 meses (vida media de los eritrocitos maduros 120 días). Por eso, la HbA1c permite controlar los niveles de glucosa sanguínea a largo plazo en pacientes con diabetes mellitus.

Actualmente existen diferentes metodologías que permiten cuantificar la HbA1c, como ser: HPLC (High Performance Liquid Chromatography), electroforesis en agarosa, electroforesis capilar y métodos inmunoturbidimétricos.

Materiales y Métodos

Reactivos empleados para los estudios comparativos: Hemoglobin A1C, Pointe Scientific Inc., método basado en la interacción antígenoanticuerpo para medir el % de HbA1C; mediante el agregado de anticuerpo monoclonal de ratón anti-HbA1c y partículas de látex. Se forma un complejo látex-HbA1C-anticuerpo de complejos insolubles al agregar un anticuerpo de cabra anti-ratón. El incremento de turbidez es proporcional a la concentración de HbA1C presente.

A1C-2 Tina-quant Hemoglobin A1C Gen.2, Roche Diagnostics GmbH, es un inmunoensayo turbidimétrico de inhibición, la HbA1C reacciona con el anticuerpo anti-HbA1C formando complejos solubles antígeno-anticuerpo. Al añadir el segundo reactivo los polihaptenos reaccionan con los anticuerpos anti-HbA1C en exceso y forman complejos insolubles que se determinan turbidimétricamante. El incremento de turbidez es indirectamente proporcional a la concentración de HbA1C presente. La estimación del porcentaje de HbA1c se realiza midiendo la Hb total con un reactivo específico. Los controles empleados: Glycohemoglobin Controls, Pointe Scientific Inc.; Lyphochek® Diabetes Control, BIO-RAD.

Resultados

Se seleccionaron 146 muestras al azar y se procesaron con ambos reactivos en un autoanalizador Architect c16000 de la firma Abbott, obteniéndose los siguientes resultados:

Se realizaron mediciones de la HbA1C en controles comerciales para verificar la precisión de acuerdo al protocolo EP-5 A del CLSI, obteniéndose los siguientes resultados:

Conclusiones 

• El análisis de los datos concluye que no existen diferencias estadísticamente significativas entre las medias halladas.
• El análisis de regresión arroja un coeficiente de correlación de 0.9506.
• Se observan ventajas operativas con el reactivo de la firma Pointe Scientific Inc , a saber:

          – Calibraciones estables

          – Menor CV%, entre días

          – Se utiliza una sola medición por muestra, lo que conduce a menor tiempo de obtención del resultado.

Referencias Bibliográficas

*LSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-NCCLS)- Protocols EP5-A, 1999 / EP17-A, 2004. The Dia-betes Control and Complications Trial Research-Group-N. Engl. J. Med. 329:977

*Aproved IFCC Reference Method for the Measurement of HbA1c in Human Blood,IFCC, Clin Chem Lab Med 2002;40 (1):78-89

*American Diabetes Association-Standard of Medical Care in Diabetes-2009. Diabetes Care, Vol. 32 Suppl 1, January 20096-Ref (13)

*Kunkel, H.G., Wallenuis, G. New hemoglobins in normal adult blood. Science, 1955; 122:288-290.

*Allen, D.W., Schroeder, W.A., Balog, J. Observation on the chromatographic heterogeneity of normal adult and fetal human hemoglobin: A study of the effects of crystallization an fetal human hemoglobin A study of the effects of crystallization and chromatography on the heterogeneity and isoleucin content. IBID. 1958; 80 1628-1634.

*Rahbar, S. An abnormal hemoglobin in red celIs of diabetes. Clin Chim. Acta 1968, 22:296-298

*German F. Sáenz Renauld, Luis F. Rojas Solano, Mario Chaves Villalobos, Eugenia Quintana Guzmán, Javier Jiménez Araya, Alberto G. Montero Porras. Las hemoglobinas glicosiladas. Comparación de tres métodos cuantitativos para su estudio. Revista Costarricense de Ciencias Médicas, Vol 7 (1); 29-40