Revista Bioreview Edición 27 - Noviembre 2013

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CUBRA XII-2013 70º Congreso Argentino de Bioquímica de la ABA

CUBRA News. Boletín informativo de la CUBRA.

El exitoso Congreso CUBRA XII-2013 - 70º Congreso Argentino de Bioquímica de la ABA, se realizó desde el 9 al 11 de octubre de 2013 en el Centro de Convenciones Palais Rouge, Salguero 1443, Ciudad de Buenos Aires. La organización estuvo a cargo de la Confederación Unificada Bioquímica de la República Argentina (CUBRA), la Asociación Bioquímica Argentina (ABA) y el Colegio Oficial de Farmacéuticos y Bioquímicos de la Capital Federal (COFyBCF), a quienes felicitamos por el esfuerzo y dedicación.

La propuesta de temario fue una variada experiencia de temas que atañen al quehacer bioquímico, Emergentología/Medio Interno; Endocrinología; Hematología/Hemostasia; Microbiología, nuevas metodologías; Autoinmunidad;Gestión de Calidad; Química Clínica; Farmacogenónica/ Toxicología; Diagnóstico Molecular Oncológico; Espectrometría de masa. Con la presencia de profesionales destacados a nivel mundial se pudo disfrutar de avances y novedades, entre ellos el Dr. Ole Siggaard Andersen (Dinamarca), Profesor emérito de Bioquímica Clínica de la Universidad de Copenhague, Dinamarc; Dr. Francisco Baralle (Italia), Director General, International Centre for Genetic Engineering and Biotechnology, Trieste, Italia; Dr. Luis Eduardo Coelho Andrade (Brasil), Profesor de Reumatología, Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de Sao Paulo (UNIFESP); Donald Mason M.Sc. (USA) Waters – Global Scientific Affairs Manager; Dr. Ismael Dale Cotrim Guerreiro da Silva (Brasil) Profesor Adjunto Livre Docente Coordenador do Laboratorio de Biologia Molecular do Departamento de Ginecologia da Universidade Federal de Sao Paulo; Dr. Kiyoshi Ichihara (Japón) Chair of the Committee on Reference Intervals and Decision Limits, IFCC; Dr.  Juan Sabater Tobella (España) Presidente de Honor de la Real Academia de Farmacia de Cataluña.

Se dieron lugar a actividades para las diferentes necesidades profesionales como Conferencias, Simposios, Conferencias de la Industria, Talleres de la Comisión de Residentes Bioquímicos (COREBIO), Cursos Pre-congreso, Cursos Intra-congreso, la presentación de  Comunicaciones Libres y de Pósteres con Coordinadores de cada Especialidad. Entrega de Premios a las Actividades Científica y una amplia Exposición Comercial, generaron un espacio de comunicación que permitió a los asistentes un rico intercambio de experiencias técnico profesionales-comerciales.

Desde el Staff de Revista Bioreview y de CUBRANews extendemos  nuestras más sinceras felicitaciones a quienes presidieron este Congreso, el Dr. Juan Carlos Galli y el Dr. Alberto Villagra, y a través de ellos a todo el equipo de gente que conformó el comité organizador, quienes asumieron incansablemente la tarea de llevar adelante este evento.

Algunas de las Conferencias Destacadas del Congreso CUBRA XII-2013 - 70º Congreso Argentino de Bioquímica de la ABA

La Historia de los gases y los iones Hidrógenos de la sangre

Conferencista: Ole Siggaard Andersen M.D., Ph.D. (Dinamarca) - Profesor emérito de Bioquímica Clínica de la Universidad de Copenhague, Dinamarca.

Secretaria: Dra. Silvia González - Jefe de Servicio, Laboratorio Clínico del Hospital María Ferrer, Ciudad Autónoma de Buenos Aires.

Los estudios del dióxido de carbono, del oxígeno y los iones hidrógeno de la sangre comenzaron a fines de los años 1800 y la mayor parte de la bioquímica y la fisiología relacionadas al transporte  de dióxido de carbono y oxígeno en la sangre fue revelada a comienzos de los años 1900.

Copenhague, Dinamarca, fue el epicentro de muchos de esos estudios. Nombres como S.P.L. Sørensen (introdujo el pH en 1907), K.A. Hasselbalch (formuló la ecuación de Henderson- Hasselbalch en 1917), N.J. Brønsted (definió los conceptos de ácido y base en 1923), Christian Bohr (describió el efecto Bohr en 1905) se unen a aquella época.

En 1952-53 Copenhague sufrió una grave epidemia de polio. El profesor Astrup se dio cuenta de la necesidad de disponer de mejores métodos para evaluar el estado de la respiración de los  pacientes y tomó la iniciativa de construir un aparato para la medida del pH y la pCO2 con la ayuda de la empresa Radiometer. El departamento de Astrup en el Hospital Universitario de Copenhague fue un centro de nuevos estudios de los gases y los iones hidrógeno de la sangre.

Astrup introdujo el método de equilibración, y con la ayuda de mi normograma de curvas el  método permitió calcular la pCO2, el bicarbonato y el exceso de base.

Este último fue introducido como la mejor medición de una acidosis o alcalosis metabólica. Hoy lo llamaría exceso de iones hidrógeno (con el signo opuesto). En 1958 desarrollamos el equipo para hacer las mediciones en pocas gotas de sangre, y el Astrup Microequipment fue una gran ayuda en el diagnóstico de enfermedades respiratorias neonatológicas.

Casi simultáneamente, el Profesor John W. Severinghaus construyó el electrodo de pCO2, que gradualmente desplazó al método de equilibración de Astrup.

Previamente, Leland Clark había  descrito el electrodo de pO2. En poco tiempo la tecnología se desarrolló radicalmente. Hoy la  medición de los gases y los iones hidrógeno de la sangre se hace en forma completamente  automática y los cálculos se hacen por microprocesores.

Estos últimos se realizan con ayuda de  importantes ecuaciones: La ecuación de Henderson-Hasselbalch describe la relación entre pH, pCO2 y bicarbonato; la ecuación de Van Slyke describe la relación entre pH y el exceso de iones hidrógenos; la ecuación de Tanh es un modelo matemático de la curva de disociación de oxígeno.

Para muchos, el normograma curvo proveyó una mejor comprensión de la relación entre las diferentes variables ácido-base que el protocolo impreso por el equipo ácidobase.

Hoy el problema no es la medición de las variables sino la interpretación de la multitud de ellas. Por eso he hecho un programa computarizado que se puede descargar gratis desde. El programa produce gráficos como el Acid-Base Chart y el Oxygen Graph.Ambos pueden ser de utilidad educativa en bioquímica y fisiología y también en el diagnóstico clínico.

Aplicaciones de la Farmacogenética en la práctica clínica

Conferencista: Dr. Juan Sabater Tobella (España) - Presidente de Honor de la Real Academia de Farmacia de Cataluña.

El Problema

En terapéutica hay un problema importante y que requiere utilizar todos los medios disponibles  para su solución: la variabilidad de la respuesta farmacológica a nivel individual. Se sabe que a muchos pacientes una medicación adecuada "según protocolos" no produce el efecto terapéutico deseado o incluso produce efectos tóxicos. La FDA en un informe del 7 de noviembre de 2011, reportó que en USA al año se producen 700.000 ingresos a urgencias por reacciones adversas a los medicamentos, de los cuales 120.000 requirieron hospitalización y todo ello con un coste a los sistemas de salud de 3.500 millones de dólares, y lo más interesante: el 90% de los pacientes estaban correctamente medicados según protocolos de sociedades u hospitales de reconocida solvencia. Datos similares en relación a la población involucrada, se reportan en publicaciones de varios países.

Las Soluciones

Que existen interacciones entre fármacos es conocido y se informa en los folletos de los medicamentos, pero ¿se saben de memoria por parte del médico a la hora de prescribir? ¿Se revisa para cada paciente el conjunto de su medicación –de varios médicos y de la propia  automedicación- en una base de datos que informe de las posibles interacciones entre los componentes del conjunto de la medicación? Creo sinceramente que en general no suele hacerse, y debería hacerse ya que puede hacerse pues hay herramientas informatizadas asequibles para  ello. Pero además de estos hechos poblacionales hay la respuesta personal a los fármacos debido a la genética individual. Gracias a la descodificación del genoma humano, entregada a la comunidad científica en el año 2003 por el equipo liderado por el Prof. James Watson, sabemos que la molécula de ADN consta de 3.200 millones de pares de bases, conocemos el orden de  bases en la secuencia y además sabemos que entre los humanos nos diferenciamos por tener  bases diferentes en 3 millones de posiciones de nuestro ADN individual.

La mayoría de estos cambios de bases son "silentes" pues, en el caso del exoma que es lo hasta hoy más estudiado, el triplete de bases afectado por el cambio de una base, puede ser que codifique el mismo aminoácido, o que produzca un cambio en un parte poco funcional de la molécula de la proteína,  pero en algunos casos puede modificar la calidad funcional de la proteína que codifica el gen correspondiente (enzima, proteína transportadora de membrana, receptor del órgano diana, entre otras) y puede producir desde una enfermedad genética, hasta no producir ningún efecto patológico pero pudiendo predisponer a algunos en función de los hábitos de vida, entre ellos la medicación. Se acepta por lo tanto que una misma persona, en función de sus genes, puede reaccionar de forma diferente a un mismo fármaco. Relación genes y fármacos, nace una nueva rama de la Farmacología: La Farmacogenética.

Farmacogenética

Es la ciencia que estudia el efecto que un fármaco va a producir en cada persona en función de sus genes. Es la causa de la "variabilidad individual" que se reporta en todos los ensayos clínicos. Su finalidad: los fármacos adecuados, a la dosis correcta, para cada persona en función de sus genes con el fin de obtener la acción farmacológica deseada y a su vez minimizar al máximo la  posibilidad de efectos adversos. Hoy es una ciencia completamente desarrollada, transversal en las especialidades médicas (prácticamente todos los médicos prescriben medicamentos) y que los farmacéuticos y bioquímicos no podemos mirar como una especialidad ajena sino propia.

Con gran frecuencia tras una conferencia sobre conceptos de Farmacogenética, el moderador de la sesión me suele decir "muy interesante es la medicina del futuro", pero es que no es del futuro  es ya la medicina de hoy y si no se aplica es por una causa "multifactorial" y entre ellas el que quizás los que integramos precisamente la profesión más ligada al medicamento, no hemos  sabido liderar el proceso de su conocimiento.

En la conferencia, además de exponer los principios básicos, se van a poner ejemplos de aplicaciones de la Farmacogenética a la medicina asistencial de nivel primario, entre ellas el tratamiento con anticoagulantes, cómo evitar una miopatía por estatinas, problemas en el tratamiento de pacientes psiquiátricos, cómo decidir si debe darse Aspirina® en prevención primaria y otros que van a demostrar que la Farmacogenética debe ya formar parte de la práctica médica asistencial tanto a nivel primario como a nivel hospitalario en oncología y tratamientos altamente especializados.

Mecanismos de autorregulación de las proteínas que se unen al RNA y su relación con la  enfermedad humana

Conferencista: Dr. Francisco Baralle (Italia) - Centro Internacional de Ingeniería Genética y Biotecnología, Trieste (Italia).

Secretario: Dr. Martín Monte - Doctor en Ciencias Biológicas Universidad de Buenos Aires.

El papel de la hnRNP TDP-43 en la patogénesis de la esclerosis lateral amiotrófica (ALS) y la degeneración lobular frontotemporal (DLFT).

Introducción

El mantenimiento de una correcta homeostasis proteica (proteostasis) es esencial en las células de los mamíferos para preservar sus propiedades y funciones vitales. Esta proteostasis es conseguida por variados mecanismos y a distintos niveles de las vías de expresión genética.

En muchos casos, se ha visto que las vías autoregulatorias del RNAm basadas en mecanismos de retroalimentación juegan un papel importante para mantener su concentración bajo control. Esto es particularmente relevante para el caso de las proteínas que se unen al RNA, por el potencial para unir sus propias moléculas de pre-RNAm. En relación con este mecanismo, la degradación nonsense - mediada del RNA disparada por la ruptura alternativa de su propio RNAm es una vía autoregulatoria habitual para mantener niveles de expresión en el medio celular.

La proteína de unión al ARN TDP-43 está fuertemente ligada a la neurodegeneración. Las mutaciones en el gen que codifica la TDP-43 están asociadas a diversas enfermedades, y también es un constituyente principal de las inclusiones intracelulares patológicas en estas enfermedades.

Estudios recientes han ampliado considerablemente el entendimiento sobre su fisiología. Se sabe que TDP-43 juega un papel importante en el metabolismo del RNA neuronal. Se une y regula el corte, el empalme y la estabilidad de numerosos ARN que codifican proteínas implicadas en el desarrollo neuronal, la función sináptica y la neurodegeneración. Por lo tanto, una pérdida de estas funciones esenciales es una hipótesis atractiva sobre su papel en esa patología.

Resumen

El Factor nuclear TDP-43 es una proteína de unión de ARN multifuncional que desempeña un papel en varios procesos celulares. En el año 2006, se encontró que TPD-43 era el principal componente proteico de las inclusiones intracelulares en una serie de enfermedades neurodegenerativas (ALS y DLFT). En las neuronas afectadas, TDP-43 está anormalmente ubicado, en el citoplasma donde forma agregados insolubles.

Hemos generado líneas celulares como la HEK-293, que expresan formas de tipo salvaje y mutante de TDP-43 que también son si-resistente, permitiendo de este modo la producción de la proteína endógena. Hemos observado que el TDP-43 controla su propia  expresión a través de un ciclo de retroalimentación negativa, lo que promueve la inestabilidad del ARN cuando se une una secuencia 3'UTR en su propio ARNm. Aunque las propiedades de unión de ARN son esenciales para este proceso de auto-regulación, nuestras líneas celulares estables también mostraron que la región carboxi-terminal de TDP-43 podría ser necesaria para este proceso. Estos resultados nos permiten especular que la agregación nuclear o citoplasmática de TDP-43 puede romper el ciclo de auto-regulación secuestrando la proteína funcional y entonces aumentando la producción de TDP-43.

También nos focalizamos en las regiones responsables de la agregación de TDP-43 al descubrir que una región rica en repeticiones Q/N localizadas entre los residuos 321 a 366 del dominio C-Terminal de TDP-43, pueden inducir la agregación cuando se sobre-expresa en una variedad de líneas celulares. Esta región también es responsable de la interacción entre las proteínas hnRNP TDP-43 y otras, lo que sugiere una variedad de conexiones posibles.

El modelo de agregación anteriormente descrito ha demostrado alterar las funciones de TDP-43 y pequeños efectores moleculares que están siendo examinados por su potencial para prevenir o  revertir la agregación.

El perfil lipidómico predice la respuesta patológica al tratamiento semanal neoadjuvante con paclitaxe

Dr. Ismael Dale Cotrim Guerreiro da Silva MD PhD (Brasil) & Col. Department of Gynecology, Federal University of São Paulo, São Paulo – Brazil

Introducción

La metabolómica y la lipidómica son herramientas potentes que permiten la detección de múltiples pequeños metabolitos en muestras biológicas. Las diferencias entre especies de estos metabolitos permiten la caracterización de fenotipos y las respuestas biológicas a las perturbaciones  (enfermedades, modificaciones genéticas, o al tratamiento nutricional o farmacológico).

Esta información les permite a los científicos entender cómo trabaja un organismo específico, y entender el mecanismo subyacente de una enfermedad.La metabolómica y la lipidómica ayudarán a la comunidad médica a alcanzar la promesa de la medicina personalizada y llevar la investigación académica y farmacéutica desde el laboratorio al lado de la cama del paciente  potenciando la investigación y el descubrimiento de nuevas moléculas.

Los lípidos juegan un rol primordial en almacenamiento de energía, señalización celular, y patofisiología de las enfermedades, como el cáncer, enfermedades neurodegenerativas,  infecciones, diabetes, etc.

Los avances en la espectrometría de masas (MS), han permitido el  estudio de los lípidos con gran sensibilidad y especificidad, facilitando la solución de los problemas de coelución e interferencia isobárica, facilitando la detección y caracterización de moléculas den baja concentración.

Fundamentos

La quimioterapia neoadyuvante, es una de las estrategias más importantes en el tratamiento de cáncer de mama avanzado. El taxano paclitaxel es un importante inhibidor de la polimerización microtubular previniendo de esta manera la entrada en mitosis de las células. Desde los años 90 se ha mostrado la eficacia terapéutica y el perfil de toxicidad de la administración semanal de paclitaxel.

La lipidómica puede definirse como el estudio a gran escala de las vías metabólicas y  de las redes de los lípidos celulares en los sistemas biológicos. La investigación lipidómica podría  identificar y cuantificar miles de lípidos celulares y su correlación con los cambios que se producen durante las enfermedades y los tratamientos.

Objetivos

Identificar y analizar el fingerprint lipídico en biopsias de pacientes con tumores de mama a avanzados que alcanzan una respuesta completa (CPR, complete pathological response) al tratamiento semanal con paclitaxel en comparación con el de los pacientes que no la alcanzan.

Materiales y métodos

Setenta y ocho pacientes con cáncer de mama en estadio IIIA seleccionados para recibir el tratamiento semanal con paclitaxel (en total 12 dosis de 80 mg/m2). Cincuenta y ocho completaron el tratamiento, siete lograron la CPR (GrupoA), y cinco sufrieron progresión  (GrupoB). Los lípidos fueron extraídos y llevados a un MALDI/MS (matrixassisted laser  desorption/ionization mass spectrometry).

Los espectros fueron adquiridos dentro del rango m/z 700-1200, en positive ion-reflectron mode en un espectrómetro Synapt Q-ToF (Waters, Manchester, UK). En cada espectro, las señales iónicas más intensas fueron tomadas como la base para los valores m/z. Estos que fueron  claramente distintos de nivel de ruido en el espectro se incluyeron en el análisis de componentes  principales (PCA).

Resultados

El análisis PCA de los espectros de masas muestra que los grupos pueden ser resueltos a través  de sus perfiles de lípidos MALDI-MS. Estro sugiere que los pacientes con CPR pueden presentar  distinto fingerpirnt lipídico en la biopsia de los tumores, en comparación con los pacientes que mostraron progresión de la enfermedad.

Conclusiones

Es posible que el perfil lipidómico de las muestras de tumores pueda ayudarnos a seleccionar a  los pacientes con cáncer de mama avanzado que puedan presentar la respuesta patológica completa al tratamiento con paclitaxel semanal.

Urgencias Tiroideas

Disertante: Dra. Graciela Astarita. Bioquímica Especialista en Endocrinología de la División Endocrinología del Hospital Carlos G. Durand

Las urgencias tiroideas son complicaciones graves del hipotiroidismo e hipertiroidismo severos. Se deben a deficiencia severa de hormonas tiroideas: coma mixedematoso o por contraste, a aumento descompensado de las mismas: crisis tirotóxica o tormenta tiroidea. Son situaciones poco frecuentes. Su pronóstico es malo. Para reducir el riesgo de muerte es importante:

  •  entender la patogénesis de estas condiciones;
  •  reconocer los signos y síntomas clínicos;
  •  diagnostico rápido y seguro.

En general hay factores interecurrentes precipitantes que desencadenan el proceso: enfermedad sistémica, infecciones, drogas, estrés, traumatismos.El éxito terapéutico se basa en el tratamiento específico de la alteración tiroidea, de los factores precipitantes y las medidas de soporte de las funciones vitales comprometidas.

La etiología del coma mixedematoso es un hipotiroidismo no diagnosticado. La presentación más común es en mujeres mayores de 50-60 años. Se presenta más en invierno. Se caracteriza por hipotermia. El paciente se puede presentar en estado de pre-coma o coma.

La crisis tirotóxica es la manifestación extrema de la tirotoxicosis. Las etiologías más frecuentes  son las mismas que en la tirotoxicosis no complicada: enfermedad de Graves, bocio multinodular tóxico, hipertiroidismo yodo inducido y tirotoxicosis facticia. La edad de presentación no difiere de  los hipertiroideos no complicados (20 a 70 años). El aumento brusco y rápido de las hormonas tiroideas libres juega un rol protagónico. Los rasgos clínicos de la tirotoxicosis no complicada  están presentes y exacerbados. Se caracteriza por hipertermia, taquicardia y falla multiorgánica.

Se presenta caso clínico de una mujer de 38 años con enfermedad de Graves, que después de  dos semanas de haber recibido una dosis terapéutica de I131 se internó en Terapia Intensiva. La paciente sufrió una crisis tirotóxica.

Hubo dos posibles factores precipitantes: la dosis de yodo recibida y una peritonitis apendicular gangrenosa.

Identificación de Bacilos positivos: MALDI-TOF

Disertante: Dra. Claudia Barberis. Jefe de Trabajos Prácticos de Microbiología Clínica. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos Aires

Se evaluó la aplicación de la espectrometría de masa por MALDI-TOF, en Argentina frente a una vasta colección de bacilos Gram-positivos (BGP). Los resultados obtenidos revelaron que la mayoría de estos microorganismos pueden ser identificados a nivel de especie. La precisión y rapidez con que se logró identificar BGP aerobios conducirá a los laboratorios de Microbiología  Clínica a conocer mejor el impacto clínico-epidemiológico de estos microorganismos en un futuro cercano.

En relación a la identificación con MALDI-TOF (Bruker, Biotyper 3,1) no mostró diferencias en cuanto a la puntuación ("score") entre los métodos de preparación bacteriana: directo de colonia vs extracción.

Con referencia a la identificación de Corynebacterium spp., sobre 216 aislados se identificaron 97,7% y 93,5% a nivel de género y especie respectivamente.

En relación a los géneros Actinomyces, Arcanobacterium, Bifidobacterium, Propionibacterium y Varibaculum, los resultados de la identificación fueron satisfactorios (91,5% y 95,7 % a nivel especie y genero respectivamente) teniendo en cuenta la complejidad y la demora en la identificación fenotípica convencional para estos microorganismos en comparación con el escaso tiempo que requiere la espectrometría de masa MALDI-TOF.

En relación a los BGP pigmentados, el género Leifsonia no pudo ser identificado pero la mayoría de los aislados de Microbacterium, Brevibacterium, Arthrobacter y Cellulosimicrobium fueron identificados a nivel de especie.

Sin tener en cuenta el costo del instrumental, el costo de consumibles necesarios para la identificación es bajo en  comparación a los otros métodos fenotípicos convencionales.

La identificación de BGP aerobios mediante la aplicación de la espectrometría de masa por MALDITOF, es una metodología fiable. La rapidez con la que identifican con alta precisión los BGP corineformes en su totalidad constituye la principal ventaja de este método dado que hace posible la información de la identidad bacteriana  una vez que se ha obtenido el crecimiento del microorganismo.

 

 

El exitoso Congreso CUBRA XII-2013 - 70º Congreso Argentino de Bioquímica de la ABA, se realizó desde el 9 al 11 de octubre de 2013 en el Centro de Convenciones Palais Rouge, Salguero 1443, Ciudad de Buenos Aires. La organización estuvo a cargo de la Confederación Unificada Bioquímica de la República Argentina (CUBRA), la Asociación Bioquímica Argentina (ABA) y el Colegio Oficial de Farmacéuticos y Bioquímicos de la Capital Federal (COFyBCF), a quienes felicitamos por el esfuerzo y dedicación.

La propuesta de temario fue una variada experiencia de temas que atañen al quehacer bioquímico, Emergentología/Medio Interno; Endocrinología; Hematología/Hemostasia; Microbiología, nuevas metodologías; Autoinmunidad;Gestión de Calidad; Química Clínica; Farmacogenónica/ Toxicología; Diagnóstico Molecular Oncológico; Espectrometría de masa. Con la presencia de profesionales destacados a nivel mundial se pudo disfrutar de avances y novedades, entre ellos el Dr. Ole Siggaard Andersen (Dinamarca), Profesor emérito de Bioquímica Clínica de la Universidad de Copenhague, Dinamarc; Dr. Francisco Baralle (Italia), Director General, International Centre for Genetic Engineering and Biotechnology, Trieste, Italia; Dr. Luis Eduardo Coelho Andrade (Brasil), Profesor de Reumatología, Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de Sao Paulo (UNIFESP); Donald Mason M.Sc. (USA) Waters – Global Scientific Affairs Manager; Dr. Ismael Dale Cotrim Guerreiro da Silva (Brasil) Profesor Adjunto Livre Docente Coordenador do Laboratorio de Biologia Molecular do Departamento de Ginecologia da Universidade Federal de Sao Paulo; Dr. Kiyoshi Ichihara (Japón) Chair of the Committee on Reference Intervals and Decision Limits, IFCC; Dr.  Juan Sabater Tobella (España) Presidente de Honor de la Real Academia de Farmacia de Cataluña.

Se dieron lugar a actividades para las diferentes necesidades profesionales como Conferencias, Simposios, Conferencias de la Industria, Talleres de la Comisión de Residentes Bioquímicos (COREBIO), Cursos Pre-congreso, Cursos Intra-congreso, la presentación de  Comunicaciones Libres y de Pósteres con Coordinadores de cada Especialidad. Entrega de Premios a las Actividades Científica y una amplia Exposición Comercial, generaron un espacio de comunicación que permitió a los asistentes un rico intercambio de experiencias técnico profesionales-comerciales.

Desde el Staff de Revista Bioreview y de CUBRANews extendemos  nuestras más sinceras felicitaciones a quienes presidieron este Congreso, el Dr. Juan Carlos Galli y el Dr. Alberto Villagra, y a través de ellos a todo el equipo de gente que conformó el comité organizador, quienes asumieron incansablemente la tarea de llevar adelante este evento.

Algunas de las Conferencias Destacadas del Congreso CUBRA XII-2013 - 70º Congreso Argentino de Bioquímica de la ABA

La Historia de los gases y los iones Hidrógenos de la sangre

Conferencista: Ole Siggaard Andersen M.D., Ph.D. (Dinamarca) - Profesor emérito de Bioquímica Clínica de la Universidad de Copenhague, Dinamarca.

Secretaria: Dra. Silvia González - Jefe de Servicio, Laboratorio Clínico del Hospital María Ferrer, Ciudad Autónoma de Buenos Aires.

Los estudios del dióxido de carbono, del oxígeno y los iones hidrógeno de la sangre comenzaron a fines de los años 1800 y la mayor parte de la bioquímica y la fisiología relacionadas al transporte  de dióxido de carbono y oxígeno en la sangre fue revelada a comienzos de los años 1900.

Copenhague, Dinamarca, fue el epicentro de muchos de esos estudios. Nombres como S.P.L. Sørensen (introdujo el pH en 1907), K.A. Hasselbalch (formuló la ecuación de Henderson- Hasselbalch en 1917), N.J. Brønsted (definió los conceptos de ácido y base en 1923), Christian Bohr (describió el efecto Bohr en 1905) se unen a aquella época.

En 1952-53 Copenhague sufrió una grave epidemia de polio. El profesor Astrup se dio cuenta de la necesidad de disponer de mejores métodos para evaluar el estado de la respiración de los  pacientes y tomó la iniciativa de construir un aparato para la medida del pH y la pCO2 con la ayuda de la empresa Radiometer. El departamento de Astrup en el Hospital Universitario de Copenhague fue un centro de nuevos estudios de los gases y los iones hidrógeno de la sangre.

Astrup introdujo el método de equilibración, y con la ayuda de mi normograma de curvas el  método permitió calcular la pCO2, el bicarbonato y el exceso de base.

Este último fue introducido como la mejor medición de una acidosis o alcalosis metabólica. Hoy lo llamaría exceso de iones hidrógeno (con el signo opuesto). En 1958 desarrollamos el equipo para hacer las mediciones en pocas gotas de sangre, y el Astrup Microequipment fue una gran ayuda en el diagnóstico de enfermedades respiratorias neonatológicas.

Casi simultáneamente, el Profesor John W. Severinghaus construyó el electrodo de pCO2, que gradualmente desplazó al método de equilibración de Astrup.

Previamente, Leland Clark había  descrito el electrodo de pO2. En poco tiempo la tecnología se desarrolló radicalmente. Hoy la  medición de los gases y los iones hidrógeno de la sangre se hace en forma completamente  automática y los cálculos se hacen por microprocesores.

Estos últimos se realizan con ayuda de  importantes ecuaciones: La ecuación de Henderson-Hasselbalch describe la relación entre pH, pCO2 y bicarbonato; la ecuación de Van Slyke describe la relación entre pH y el exceso de iones hidrógenos; la ecuación de Tanh es un modelo matemático de la curva de disociación de oxígeno.

Para muchos, el normograma curvo proveyó una mejor comprensión de la relación entre las diferentes variables ácido-base que el protocolo impreso por el equipo ácidobase.

Hoy el problema no es la medición de las variables sino la interpretación de la multitud de ellas. Por eso he hecho un programa computarizado que se puede descargar gratis desde. El programa produce gráficos como el Acid-Base Chart y el Oxygen Graph.Ambos pueden ser de utilidad educativa en bioquímica y fisiología y también en el diagnóstico clínico.

Aplicaciones de la Farmacogenética en la práctica clínica

Conferencista: Dr. Juan Sabater Tobella (España) - Presidente de Honor de la Real Academia de Farmacia de Cataluña.

El Problema

En terapéutica hay un problema importante y que requiere utilizar todos los medios disponibles  para su solución: la variabilidad de la respuesta farmacológica a nivel individual. Se sabe que a muchos pacientes una medicación adecuada "según protocolos" no produce el efecto terapéutico deseado o incluso produce efectos tóxicos. La FDA en un informe del 7 de noviembre de 2011, reportó que en USA al año se producen 700.000 ingresos a urgencias por reacciones adversas a los medicamentos, de los cuales 120.000 requirieron hospitalización y todo ello con un coste a los sistemas de salud de 3.500 millones de dólares, y lo más interesante: el 90% de los pacientes estaban correctamente medicados según protocolos de sociedades u hospitales de reconocida solvencia. Datos similares en relación a la población involucrada, se reportan en publicaciones de varios países.

Las Soluciones

Que existen interacciones entre fármacos es conocido y se informa en los folletos de los medicamentos, pero ¿se saben de memoria por parte del médico a la hora de prescribir? ¿Se revisa para cada paciente el conjunto de su medicación –de varios médicos y de la propia  automedicación- en una base de datos que informe de las posibles interacciones entre los componentes del conjunto de la medicación? Creo sinceramente que en general no suele hacerse, y debería hacerse ya que puede hacerse pues hay herramientas informatizadas asequibles para  ello. Pero además de estos hechos poblacionales hay la respuesta personal a los fármacos debido a la genética individual. Gracias a la descodificación del genoma humano, entregada a la comunidad científica en el año 2003 por el equipo liderado por el Prof. James Watson, sabemos que la molécula de ADN consta de 3.200 millones de pares de bases, conocemos el orden de  bases en la secuencia y además sabemos que entre los humanos nos diferenciamos por tener  bases diferentes en 3 millones de posiciones de nuestro ADN individual.

La mayoría de estos cambios de bases son "silentes" pues, en el caso del exoma que es lo hasta hoy más estudiado, el triplete de bases afectado por el cambio de una base, puede ser que codifique el mismo aminoácido, o que produzca un cambio en un parte poco funcional de la molécula de la proteína,  pero en algunos casos puede modificar la calidad funcional de la proteína que codifica el gen correspondiente (enzima, proteína transportadora de membrana, receptor del órgano diana, entre otras) y puede producir desde una enfermedad genética, hasta no producir ningún efecto patológico pero pudiendo predisponer a algunos en función de los hábitos de vida, entre ellos la medicación. Se acepta por lo tanto que una misma persona, en función de sus genes, puede reaccionar de forma diferente a un mismo fármaco. Relación genes y fármacos, nace una nueva rama de la Farmacología: La Farmacogenética.

Farmacogenética

Es la ciencia que estudia el efecto que un fármaco va a producir en cada persona en función de sus genes. Es la causa de la "variabilidad individual" que se reporta en todos los ensayos clínicos. Su finalidad: los fármacos adecuados, a la dosis correcta, para cada persona en función de sus genes con el fin de obtener la acción farmacológica deseada y a su vez minimizar al máximo la  posibilidad de efectos adversos. Hoy es una ciencia completamente desarrollada, transversal en las especialidades médicas (prácticamente todos los médicos prescriben medicamentos) y que los farmacéuticos y bioquímicos no podemos mirar como una especialidad ajena sino propia.

Con gran frecuencia tras una conferencia sobre conceptos de Farmacogenética, el moderador de la sesión me suele decir "muy interesante es la medicina del futuro", pero es que no es del futuro  es ya la medicina de hoy y si no se aplica es por una causa "multifactorial" y entre ellas el que quizás los que integramos precisamente la profesión más ligada al medicamento, no hemos  sabido liderar el proceso de su conocimiento.

En la conferencia, además de exponer los principios básicos, se van a poner ejemplos de aplicaciones de la Farmacogenética a la medicina asistencial de nivel primario, entre ellas el tratamiento con anticoagulantes, cómo evitar una miopatía por estatinas, problemas en el tratamiento de pacientes psiquiátricos, cómo decidir si debe darse Aspirina® en prevención primaria y otros que van a demostrar que la Farmacogenética debe ya formar parte de la práctica médica asistencial tanto a nivel primario como a nivel hospitalario en oncología y tratamientos altamente especializados.

Mecanismos de autorregulación de las proteínas que se unen al RNA y su relación con la  enfermedad humana

Conferencista: Dr. Francisco Baralle (Italia) - Centro Internacional de Ingeniería Genética y Biotecnología, Trieste (Italia).

Secretario: Dr. Martín Monte - Doctor en Ciencias Biológicas Universidad de Buenos Aires.

El papel de la hnRNP TDP-43 en la patogénesis de la esclerosis lateral amiotrófica (ALS) y la degeneración lobular frontotemporal (DLFT).

Introducción

El mantenimiento de una correcta homeostasis proteica (proteostasis) es esencial en las células de los mamíferos para preservar sus propiedades y funciones vitales. Esta proteostasis es conseguida por variados mecanismos y a distintos niveles de las vías de expresión genética.

En muchos casos, se ha visto que las vías autoregulatorias del RNAm basadas en mecanismos de retroalimentación juegan un papel importante para mantener su concentración bajo control. Esto es particularmente relevante para el caso de las proteínas que se unen al RNA, por el potencial para unir sus propias moléculas de pre-RNAm. En relación con este mecanismo, la degradación nonsense - mediada del RNA disparada por la ruptura alternativa de su propio RNAm es una vía autoregulatoria habitual para mantener niveles de expresión en el medio celular.

La proteína de unión al ARN TDP-43 está fuertemente ligada a la neurodegeneración. Las mutaciones en el gen que codifica la TDP-43 están asociadas a diversas enfermedades, y también es un constituyente principal de las inclusiones intracelulares patológicas en estas enfermedades.

Estudios recientes han ampliado considerablemente el entendimiento sobre su fisiología. Se sabe que TDP-43 juega un papel importante en el metabolismo del RNA neuronal. Se une y regula el corte, el empalme y la estabilidad de numerosos ARN que codifican proteínas implicadas en el desarrollo neuronal, la función sináptica y la neurodegeneración. Por lo tanto, una pérdida de estas funciones esenciales es una hipótesis atractiva sobre su papel en esa patología.

Resumen

El Factor nuclear TDP-43 es una proteína de unión de ARN multifuncional que desempeña un papel en varios procesos celulares. En el año 2006, se encontró que TPD-43 era el principal componente proteico de las inclusiones intracelulares en una serie de enfermedades neurodegenerativas (ALS y DLFT). En las neuronas afectadas, TDP-43 está anormalmente ubicado, en el citoplasma donde forma agregados insolubles.

Hemos generado líneas celulares como la HEK-293, que expresan formas de tipo salvaje y mutante de TDP-43 que también son si-resistente, permitiendo de este modo la producción de la proteína endógena. Hemos observado que el TDP-43 controla su propia  expresión a través de un ciclo de retroalimentación negativa, lo que promueve la inestabilidad del ARN cuando se une una secuencia 3'UTR en su propio ARNm. Aunque las propiedades de unión de ARN son esenciales para este proceso de auto-regulación, nuestras líneas celulares estables también mostraron que la región carboxi-terminal de TDP-43 podría ser necesaria para este proceso. Estos resultados nos permiten especular que la agregación nuclear o citoplasmática de TDP-43 puede romper el ciclo de auto-regulación secuestrando la proteína funcional y entonces aumentando la producción de TDP-43.

También nos focalizamos en las regiones responsables de la agregación de TDP-43 al descubrir que una región rica en repeticiones Q/N localizadas entre los residuos 321 a 366 del dominio C-Terminal de TDP-43, pueden inducir la agregación cuando se sobre-expresa en una variedad de líneas celulares. Esta región también es responsable de la interacción entre las proteínas hnRNP TDP-43 y otras, lo que sugiere una variedad de conexiones posibles.

El modelo de agregación anteriormente descrito ha demostrado alterar las funciones de TDP-43 y pequeños efectores moleculares que están siendo examinados por su potencial para prevenir o  revertir la agregación.

El perfil lipidómico predice la respuesta patológica al tratamiento semanal neoadjuvante con paclitaxe

Dr. Ismael Dale Cotrim Guerreiro da Silva MD PhD (Brasil) & Col. Department of Gynecology, Federal University of São Paulo, São Paulo – Brazil

Introducción

La metabolómica y la lipidómica son herramientas potentes que permiten la detección de múltiples pequeños metabolitos en muestras biológicas. Las diferencias entre especies de estos metabolitos permiten la caracterización de fenotipos y las respuestas biológicas a las perturbaciones  (enfermedades, modificaciones genéticas, o al tratamiento nutricional o farmacológico).

Esta información les permite a los científicos entender cómo trabaja un organismo específico, y entender el mecanismo subyacente de una enfermedad.La metabolómica y la lipidómica ayudarán a la comunidad médica a alcanzar la promesa de la medicina personalizada y llevar la investigación académica y farmacéutica desde el laboratorio al lado de la cama del paciente  potenciando la investigación y el descubrimiento de nuevas moléculas.

Los lípidos juegan un rol primordial en almacenamiento de energía, señalización celular, y patofisiología de las enfermedades, como el cáncer, enfermedades neurodegenerativas,  infecciones, diabetes, etc.

Los avances en la espectrometría de masas (MS), han permitido el  estudio de los lípidos con gran sensibilidad y especificidad, facilitando la solución de los problemas de coelución e interferencia isobárica, facilitando la detección y caracterización de moléculas den baja concentración.

Fundamentos

La quimioterapia neoadyuvante, es una de las estrategias más importantes en el tratamiento de cáncer de mama avanzado. El taxano paclitaxel es un importante inhibidor de la polimerización microtubular previniendo de esta manera la entrada en mitosis de las células. Desde los años 90 se ha mostrado la eficacia terapéutica y el perfil de toxicidad de la administración semanal de paclitaxel.

La lipidómica puede definirse como el estudio a gran escala de las vías metabólicas y  de las redes de los lípidos celulares en los sistemas biológicos. La investigación lipidómica podría  identificar y cuantificar miles de lípidos celulares y su correlación con los cambios que se producen durante las enfermedades y los tratamientos.

Objetivos

Identificar y analizar el fingerprint lipídico en biopsias de pacientes con tumores de mama a avanzados que alcanzan una respuesta completa (CPR, complete pathological response) al tratamiento semanal con paclitaxel en comparación con el de los pacientes que no la alcanzan.

Materiales y métodos

Setenta y ocho pacientes con cáncer de mama en estadio IIIA seleccionados para recibir el tratamiento semanal con paclitaxel (en total 12 dosis de 80 mg/m2). Cincuenta y ocho completaron el tratamiento, siete lograron la CPR (GrupoA), y cinco sufrieron progresión  (GrupoB). Los lípidos fueron extraídos y llevados a un MALDI/MS (matrixassisted laser  desorption/ionization mass spectrometry).

Los espectros fueron adquiridos dentro del rango m/z 700-1200, en positive ion-reflectron mode en un espectrómetro Synapt Q-ToF (Waters, Manchester, UK). En cada espectro, las señales iónicas más intensas fueron tomadas como la base para los valores m/z. Estos que fueron  claramente distintos de nivel de ruido en el espectro se incluyeron en el análisis de componentes  principales (PCA).

Resultados

El análisis PCA de los espectros de masas muestra que los grupos pueden ser resueltos a través  de sus perfiles de lípidos MALDI-MS. Estro sugiere que los pacientes con CPR pueden presentar  distinto fingerpirnt lipídico en la biopsia de los tumores, en comparación con los pacientes que mostraron progresión de la enfermedad.

Conclusiones

Es posible que el perfil lipidómico de las muestras de tumores pueda ayudarnos a seleccionar a  los pacientes con cáncer de mama avanzado que puedan presentar la respuesta patológica completa al tratamiento con paclitaxel semanal.

Urgencias Tiroideas

Disertante: Dra. Graciela Astarita. Bioquímica Especialista en Endocrinología de la División Endocrinología del Hospital Carlos G. Durand

Las urgencias tiroideas son complicaciones graves del hipotiroidismo e hipertiroidismo severos. Se deben a deficiencia severa de hormonas tiroideas: coma mixedematoso o por contraste, a aumento descompensado de las mismas: crisis tirotóxica o tormenta tiroidea. Son situaciones poco frecuentes. Su pronóstico es malo. Para reducir el riesgo de muerte es importante:

  •  entender la patogénesis de estas condiciones;
  •  reconocer los signos y síntomas clínicos;
  •  diagnostico rápido y seguro.

En general hay factores interecurrentes precipitantes que desencadenan el proceso: enfermedad sistémica, infecciones, drogas, estrés, traumatismos.El éxito terapéutico se basa en el tratamiento específico de la alteración tiroidea, de los factores precipitantes y las medidas de soporte de las funciones vitales comprometidas.

La etiología del coma mixedematoso es un hipotiroidismo no diagnosticado. La presentación más común es en mujeres mayores de 50-60 años. Se presenta más en invierno. Se caracteriza por hipotermia. El paciente se puede presentar en estado de pre-coma o coma.

La crisis tirotóxica es la manifestación extrema de la tirotoxicosis. Las etiologías más frecuentes  son las mismas que en la tirotoxicosis no complicada: enfermedad de Graves, bocio multinodular tóxico, hipertiroidismo yodo inducido y tirotoxicosis facticia. La edad de presentación no difiere de  los hipertiroideos no complicados (20 a 70 años). El aumento brusco y rápido de las hormonas tiroideas libres juega un rol protagónico. Los rasgos clínicos de la tirotoxicosis no complicada  están presentes y exacerbados. Se caracteriza por hipertermia, taquicardia y falla multiorgánica.

Se presenta caso clínico de una mujer de 38 años con enfermedad de Graves, que después de  dos semanas de haber recibido una dosis terapéutica de I131 se internó en Terapia Intensiva. La paciente sufrió una crisis tirotóxica.

Hubo dos posibles factores precipitantes: la dosis de yodo recibida y una peritonitis apendicular gangrenosa.

Identificación de Bacilos positivos: MALDI-TOF

Disertante: Dra. Claudia Barberis. Jefe de Trabajos Prácticos de Microbiología Clínica. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos Aires

Se evaluó la aplicación de la espectrometría de masa por MALDI-TOF, en Argentina frente a una vasta colección de bacilos Gram-positivos (BGP). Los resultados obtenidos revelaron que la mayoría de estos microorganismos pueden ser identificados a nivel de especie. La precisión y rapidez con que se logró identificar BGP aerobios conducirá a los laboratorios de Microbiología  Clínica a conocer mejor el impacto clínico-epidemiológico de estos microorganismos en un futuro cercano.

En relación a la identificación con MALDI-TOF (Bruker, Biotyper 3,1) no mostró diferencias en cuanto a la puntuación ("score") entre los métodos de preparación bacteriana: directo de colonia vs extracción.

Con referencia a la identificación de Corynebacterium spp., sobre 216 aislados se identificaron 97,7% y 93,5% a nivel de género y especie respectivamente.

En relación a los géneros Actinomyces, Arcanobacterium, Bifidobacterium, Propionibacterium y Varibaculum, los resultados de la identificación fueron satisfactorios (91,5% y 95,7 % a nivel especie y genero respectivamente) teniendo en cuenta la complejidad y la demora en la identificación fenotípica convencional para estos microorganismos en comparación con el escaso tiempo que requiere la espectrometría de masa MALDI-TOF.

En relación a los BGP pigmentados, el género Leifsonia no pudo ser identificado pero la mayoría de los aislados de Microbacterium, Brevibacterium, Arthrobacter y Cellulosimicrobium fueron identificados a nivel de especie.

Sin tener en cuenta el costo del instrumental, el costo de consumibles necesarios para la identificación es bajo en  comparación a los otros métodos fenotípicos convencionales.

La identificación de BGP aerobios mediante la aplicación de la espectrometría de masa por MALDITOF, es una metodología fiable. La rapidez con la que identifican con alta precisión los BGP corineformes en su totalidad constituye la principal ventaja de este método dado que hace posible la información de la identidad bacteriana  una vez que se ha obtenido el crecimiento del microorganismo.

 

 

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