Revista Bioreview Edición 3 - Noviembre 2011

BIODIAGNOSTICO
LABORATORIO DE MEDICINA

 

Cuantificación de proteínas en NanoVolúmenes con el NanoPhotometer Pearl

BioSystems S.A. es representante exclusivo en Argentina de Implen Inc.
Av. Dorrego 673 1414 - Buenos Aires
Tel.: (54 11) 4854 7775
Fax: (54 11) 4857 0884

E-mail: biosyst@biosyst.com.ar

La determinación de la concentración de proteínas es un método frecuentemente usado en la práctica bioquímica diaria. Es crítico seleccionar el ensayo óptimo para cada tipo particular de muestras. La decisión de la metodología se basa en la conveniencia,cantidad y pureza de la proteína a medir, la presencia de sustancias interferentes y la exactitud requerida.

La determinación de proteínas se puede realizar por medición de la absorbancia a 280 nm (UV 280), proveniente de sus aminoácidos aromáticos, sin embargo, este método depende fuertemente de la pureza de la secuencia primaria de la proteína ya que muchas sustancias interferentes también presentan una absorbancia muy alta en el UV afectando el resultado de la medición. También se pueden emplear ensayos colorimétricos que se basan en la formación de un complejo entre un colorante específico y las proteínas en solución. Son más adecuados para mezclas proteicas y requieren un estándar proteico apropiado. Entre estos, el método de Bradford y el de Lowry son los más comunes.

El NanoPhotometer™ Pearl permite la medición de muestras de proteínas con o sin el empleo de cubetas.

La medición de proteínas sin cubetas, permite una cuantificación confiable con un volumen inicial mínimo de 0,3 uL (nanovolumen). Con la tecnología de compresión, la muestra es comprimida exactamente hacia la longitud de onda específica de medición y de manera independiente de la tensión superficial. Esto es crítico para una medición exacta de proteínas.

Existen 5 tapas para generar diferentes diluciones virtuales 1/5, 1/10, 1/50, 1/100 y 1/250. Estas garantizan la longitud de onda exacta de medición durante la vida útil del instrumento. Por lo tanto, el NanoPhotometer™ Pearl no requiere mantenimiento ni recalibraciones. A su vez, la tecnología de compresión evita la evaporación y permite recuperar la muestra, permitiendo la cuantificación de proteínas en solventes volátiles como el tolueno. El rango de barrido espectral va de 200 a 950 nm, y el rango de longitudes de onda para mediciones simples o múltiples va de 190 a 1100 nm. El rango dinámico para cuantificación proteica medido para seroalbúmina bovina está entre 0,08 y 543 mg/mL para la medición con nanovolúmenes.

Se ha demostrado un alto coeficiente de 2 correlación lineal R entre 0,9982 y 0,9992 entre las mediciones proteicas realizadas en el NanoPhotometer™ Pearl con cubetas y con el método de nanovolúmenes empleando las tapas de 10 (dilución virtual 1/10) y 50 (dilución virtual 1/50) respectivamente. Esta correlación se mantiene a través de un rango de linealidad entre 2 y 107 mg/mL.

La exactitud también demostró ser muy buena entre las mediciones realizadas comparativamente con cubetas y nanovolúmenes con coeficientes de variación muy bajos entre 0,7 y 1,7%.

En conclusión el NanoPhotometer™ Pearl permite realizar mediciones de proteínas de manera exacta, precisa y altamente reproducible en un amplio rango dinámico. La opción de trabajar con nanovolúmenes es adecuada para laboratorios con muestras limitantes, donde se requiere un resultado rápido y confiable sin necesidad de diluir la muestra y con posibilidad de recuperar la misma para subsecuentes aplicaciones.

Por último, el NanoPhotometer™ Pearl de Implen Inc. representa una buena opción para el procesamiento simple de muestras a gran escala dado los cortos tiempos de medición.
Debido a la ausencia de partes móviles en el equipo y a la tecnología de compresión de gota el instrumento es libre de mantenimiento y no requiere calibraciones contribuyendo a la reducción de costos y tiempo, permitiendo mediciones exactas y precisas durante la vida útil del mismo.

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La determinación de la concentración de proteínas es un método frecuentemente usado en la práctica bioquímica diaria. Es crítico seleccionar el ensayo óptimo para cada tipo particular de muestras. La decisión de la metodología se basa en la conveniencia,cantidad y pureza de la proteína a medir, la presencia de sustancias interferentes y la exactitud requerida.

La determinación de proteínas se puede realizar por medición de la absorbancia a 280 nm (UV 280), proveniente de sus aminoácidos aromáticos, sin embargo, este método depende fuertemente de la pureza de la secuencia primaria de la proteína ya que muchas sustancias interferentes también presentan una absorbancia muy alta en el UV afectando el resultado de la medición. También se pueden emplear ensayos colorimétricos que se basan en la formación de un complejo entre un colorante específico y las proteínas en solución. Son más adecuados para mezclas proteicas y requieren un estándar proteico apropiado. Entre estos, el método de Bradford y el de Lowry son los más comunes.

El NanoPhotometer™ Pearl permite la medición de muestras de proteínas con o sin el empleo de cubetas.

La medición de proteínas sin cubetas, permite una cuantificación confiable con un volumen inicial mínimo de 0,3 uL (nanovolumen). Con la tecnología de compresión, la muestra es comprimida exactamente hacia la longitud de onda específica de medición y de manera independiente de la tensión superficial. Esto es crítico para una medición exacta de proteínas.

Existen 5 tapas para generar diferentes diluciones virtuales 1/5, 1/10, 1/50, 1/100 y 1/250. Estas garantizan la longitud de onda exacta de medición durante la vida útil del instrumento. Por lo tanto, el NanoPhotometer™ Pearl no requiere mantenimiento ni recalibraciones. A su vez, la tecnología de compresión evita la evaporación y permite recuperar la muestra, permitiendo la cuantificación de proteínas en solventes volátiles como el tolueno. El rango de barrido espectral va de 200 a 950 nm, y el rango de longitudes de onda para mediciones simples o múltiples va de 190 a 1100 nm. El rango dinámico para cuantificación proteica medido para seroalbúmina bovina está entre 0,08 y 543 mg/mL para la medición con nanovolúmenes.

Se ha demostrado un alto coeficiente de 2 correlación lineal R entre 0,9982 y 0,9992 entre las mediciones proteicas realizadas en el NanoPhotometer™ Pearl con cubetas y con el método de nanovolúmenes empleando las tapas de 10 (dilución virtual 1/10) y 50 (dilución virtual 1/50) respectivamente. Esta correlación se mantiene a través de un rango de linealidad entre 2 y 107 mg/mL.

La exactitud también demostró ser muy buena entre las mediciones realizadas comparativamente con cubetas y nanovolúmenes con coeficientes de variación muy bajos entre 0,7 y 1,7%.

En conclusión el NanoPhotometer™ Pearl permite realizar mediciones de proteínas de manera exacta, precisa y altamente reproducible en un amplio rango dinámico. La opción de trabajar con nanovolúmenes es adecuada para laboratorios con muestras limitantes, donde se requiere un resultado rápido y confiable sin necesidad de diluir la muestra y con posibilidad de recuperar la misma para subsecuentes aplicaciones.

Por último, el NanoPhotometer™ Pearl de Implen Inc. representa una buena opción para el procesamiento simple de muestras a gran escala dado los cortos tiempos de medición.
Debido a la ausencia de partes móviles en el equipo y a la tecnología de compresión de gota el instrumento es libre de mantenimiento y no requiere calibraciones contribuyendo a la reducción de costos y tiempo, permitiendo mediciones exactas y precisas durante la vida útil del mismo.

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